Sepsis due to Yersinia enterocolitica in an aborted equine fetus: case report / Sepse por Yersinia enterocolitica em um feto equino abortado: relato de caso

Yersinia enterocolitica is a bacterium with zoonotic potential and there are no previous records of this bacteria being isolated from aborted foals. This report aims to describe a case of sepsis due to Y. enterocolitica in a seven month old aborted equine. The fequinoetus was submitted to necropsy and samples of all the organs were collected for the histological exam. Samples of liver, lung, placenta, and stomach contents were collected for bacterial culture. Macroscopically, the liver was enlarged with yellowish heterogeneous color, heart with pale myocardial areas; lungs not collapsed, heavy and shiny, thickened umbilical cord covered with fibrin and pus. Histopathologically, there was moderate multifocal necrosuppurative myocarditis and thrombosis, moderate diffuse suppurative bronchopneumonia, mild multifocal fibrinonecrotic hepatitis, and moderate diffuse necrosuppurative omphalitis with intralesional bacterial myriads and thrombosis. Mild multifocal suppurative placentitis, nephritis, myositis, cystitis, and dermatitis were also observed, in addition to mild diffuse lymphoid rarefaction. The microbiological evaluation identified Y. enterocolitica in the liver, lung, and stomach fluid. This is the first report of sepsis due to Y. enterocolitica causing an abortion in a horse. This bacterium has zoonotic importance; therefore, it should be investigated in abortion in this species, serving as a differential diagnosis in reproductive disorders.(AU)

Yersinia enterocolitica é uma bactéria com potencial zoonótico, e não há informações desse agente como causa de abortamento em equinos. O objetivo deste relato é descrever um caso de sepse por Y. enterocolitica em um feto equino abortado aos sete meses. O feto foi submetido à necropsia, e amostras de todos os órgãos foram processadas para histopatologia. Para microbiologia, foram coletadas amostras de fígado, pulmão, placenta e conteúdo estomacal. Macroscopicamente, observou-se fígado aumentado com coloração amarelada heterogênea; coração com áreas pálidas no miocárdio; pulmões não colabados, pesados e brilhantes; e cordão umbilical espessado e recoberto por fibrina e pus. Na análise histopatológica, havia miocardite necrossupurativa multifocal moderada e trombose, broncopneumonia supurativa difusa moderada, hepatite fibrinonecrótica multifocal discreta e onfalite necrossupurativa difusa moderada com miríades bacterianas intralesionais e trombose. Observou-se também placentite, nefrite, miosite, cistite e dermatite supurativa multifocal discreta, além de rarefação linfoide difusa discreta. A avaliação microbiológica identificou Y. enterocolitica no fígado, no pulmão e no líquido estomacal. Este é o primeiro relato de sepse por Y. enterocolitica causando abortamento na espécie equina. Essa bactéria tem importância zoonótica, portanto deve ser investigada em casos de abortamento nessa espécie, servindo como diagnóstico diferencial em tal distúrbio reprodutivo.(AU)

Investigation of Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica in pig carcasses in Southern Brazil / Pesquisa de Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica em carcaças de suínos no sul do Brasil

The intensification of pig production and advances in the sanitary control of herds profoundly changed the profile of risk attributed to pork consumption. In the actual scenario, most microorganisms related to macroscopic lesions observed in the post mortem inspection are not transmitted by food, while foodborne bacteria of importance to consumer health do not cause macroscopic lesions. In Brazil, the "Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento" requested a scientific opinion on the prioritizing of pathogens potentially transmitted by unprocessed pork. After conducting a qualitative risk assessment, only Salmonella enterica was classified as of high risk to consumers. The present study was part of the validation step of the risk assessment and aimed to investigate the frequency of S. enterica, Yersinia enterocolitica and Listeria monocytogenes and hygienic-sanitary indicators in pig carcasses of pigs rose under intensive production and slaughtered under the Federal Inspection System in three slaughterhouses located in Southern Brazil. Additionally, the antimicrobial resistance profile of the isolated pathogens was also investigated. A total of 378 carcasses were sampled by superficial sponges before the chilling step in three slaughterhouses. Samples were investigated for the presence of the three aforementioned pathogens and subjected to enumeration of Colony Formation Units (log CFU.cm-1) of total aerobic mesophiles (TAM) and Enterobacteriaceae. Salmonella strains were tested by disc diffusion test for resistance to eleven antimicrobials. There were significantly statistical differences (p<0.0001) on the median counts of both indicators between the slaughterhouses. The median of TAM was very close for Slaughterhouses A and B: 1.573 log CFU.cm-1 and 1.6014 log CFU.cm-1, respectively. While in Slaughterhouse C, a higher TAM median was detected (2.216 log CFU.cm-1). A similar profile was observed regarding to Enterobacteriaceae, and medians were calculated as follow: -0.426 log CFU.cm-1 in Slaughterhouse A; 0.2163 log CFU.cm-1 in B; and 0.633 log CFU.cm-1 in C. Regarding the pathogens investigated, L. monocytogenes was not detected and only one carcass from Slaughterhouse C was positive for Y. enterocolitica. Thus, the results suggest a very low prevalence of L. monocytogenes and Y. enterocolitica in the sampled population. A total of 65 (17.2%) carcasses were positive for S. enterica, with a difference in frequencies between slaughterhouses and slaughter days. The prevalence of Salmonella positive carcasses was higher in the Slaughterhouse C (25.4%; CI 95% 19-32%) in comparison with A (9.5%; CI 95% 9-14%) and B (18.3%; CI 95% 12-24%). There was no significantly statistical association between Enterobacteriaceae counts and Salmonella isolation on carcass surface (p=0.69). The slaughtering day, nested within the slaughterhouse, explains 31.3% of Salmonella prevalence variability. S. Typhimurium (38.1%) was the most prevalent, followed by S. Infantis (30.1%). Among the 61 Salmonella strains tested for resistance to antimicrobials, 18 (31.6%) were full-susceptible. No strain displayed resistance to azithromycin, ceftazidime, cefotaxime and meropenem. The highest resistance frequency was displayed to tetracycline (54.1%), followed by ampicillin (50.82%), nalidixic acid (42.62%) and chloramphenicol (42.62). Multi-resistance was detected in 52.54% of the, strains. In conclusion, S. enterica is more prevalent in pre-chill pig carcasses than Y. enterocolitica and L. monocytogenes and thus should be prioritized in monitoring and control programs at slaughter. Salmonella serovars varied among slaughterhouses and present significant differences in their resistance to antimicrobials. Slaughterhouses that present higher medians of TAM or Enterobacteriaceae in a monitoring period may have higher S. enterica prevalences as well. However, there is a high variation of S. enterica prevalence among slaughter days, which cannot be always related to the hygienic indicators counts observed on a given day.(AU)

A intensificação da produção de suínos e os avanços no controle sanitário dos rebanhos alterou de forma importante o perfil de risco do consumo de carne suína. No cenário atual, a maioria dos microrganismos causadores de lesões macroscópicas detectáveis na inspeção post mortem não são transmissíveis por alimentos, enquanto bactérias de importância como causadoras de doenças transmitidas por alimentos não causam lesões macroscópicas. No Brasil, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento solicitou uma opinião científica sobre a priorização de patógenos potencialmente transmitidos pela carne suína in natura. Após conduzir uma avaliação de risco qualitativa, apenas Salmonella enterica foi classificada como de alto risco para o consumidor. O presente estudo foi parte da etapa de validação da avaliação de risco e objetivou: investigar a frequência de S. enterica, Yersinia enterocolitica e Listeria. monocytogenes; e enumerar indicadores higiênico-sanitários em carcaças de suínos abatidos sob inspeção federal em frigoríficos dedicados ao abate de suínos sob sistema intensivo de criação no sul do Brasil. Além disso, o perfil de resistência a antimicrobianos dos patógenos isolados foi investigado. A superfície de um total de 378 carcaças foi amostrada por esponjas, na etapa de pré-resfriamento em três matadouros frigoríficos (A, B, C). As amostras foram investigadas quanto à presença dos três patógenos acima mencionados e quanto à enumeração de Unidades Formadoras de Colônia (log UFC.cm-1) de mesófilos aeróbios totais (MAT) e Enterobacteriaceae. As cepas isoladas de Salmonella foram testadas quanto à resistência a onze antimicrobianos pela técnica de disco difusão. As medianas de contagem de ambos os indicadores apresentaram diferença significativa (p<0,0001) entre matadouros-frigoríficos. A mediana de MAT foi bastante próxima para A e B (1,573 log UFC.cm-1 e 1,6014 log UFC.cm-1, respectivamente), enquanto em C uma mediana de MAT mais elevada foi determinada (2,216 log CFU.cm-1). Um perfil semelhante foi observado em relação a Enterobacteriaceae, sendo as medianas calculadas para A, B e C, respectivamente: -0,426 log CFU.cm-1; 0,2163 log UFC.cm-1; e 0,633 log UFC.cm-1. Em relação aos patógenos investigados, L. monocytogenes não foi detectada e apenas uma carcaça, do Matadouro C, foi positiva para Y. enterocolitica. Portanto, os resultados sugerem uma prevalência muito baixa desses patógenos na população amostrada. Em um total de 65 (17,2%) carcaças houve isolamento de S. enterica, com diferença nas frequências observadas entre matadouros e dias de abate. A prevalência de carcaças positivas para S. enterica foi maior no Matadouro C (25,4%; IC95% 19-32%) em comparação com A (9,5%; IC95% 9-14%) e B (18,3%; IC95% 12-24%). Não houve associação estatística entre o número de Enterobacteriaceae e o isolamento de S. enterica na superfície das carcaças (p=0,69). O dia de abate agrupado por frigorífico explica 31,3% da variação na prevalência de Salmonella. O sorovar mais frequente de S. enterica foi Typhimurium (38,1%) seguido de S. Infantis (30,1%). Entre as 61 cepas de S. enterica testadas quanto à resistência a antimicrobianos, 18 (31,6%) foram totalmente suscetíveis aos antimicrobianos testados. Nenhuma cepa apresentou resistência a azitromicina, ceftazidima, cefotaxima e meropenem. As maiores frequências de resistência foram demonstradas contra tetraciclina (54,1%), ampicilina (50,8%), ácido nalidíxico (42,62%) e cloranfenicol (42,62%). Em 52,54% das cepas foi detectada multi-resistência. Em conclusão, S. enterica é mais prevalente em carcaças suínas no pré-resfriamento do que Y. enterocolitica e L. monocytogenes. Portanto, S. enterica deve ser priorizada em programas de monitoramento e controle ao abate. Os sorovares de Salmonella variam entre matadouros e apresentam diferenças significativas na resistência a antimicrobianos. Matadouros de suínos que apresentam medianas de MAT e Enterobacteriaceae num período de monitoramento podem apresentar também prevalências mais de altas de presença de S. enterica. Entretanto, há uma alta variabilidade na frequência de S. enterica entre dias de abate, e nem sempre há relação entre essa frequência e a contagem de indicadores higiênico-sanitários determinados num determinado dia.(AU)

Brotes de enfermedades transmitidas por los alimentos estudiados mediante técnicas moleculares / Foodborne disease outbreaks studied by molecular techniques

RESUMEN Objetivo Aplicar una técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) múltiple en tiempo real para la detección de Salmonella spp., Listeria monocytogenes y Yersinia enterocolitica, como herramienta de apoyo diagnóstico en la vigilancia de brotes de enfermedad transmitida por alimentos. Materiales y Métodos Se aplicó la metodología molecular en muestras clínicas provenientes de individuos que estaban asociados a brotes de enfermedad transmitida por alimentos de dos departamentos de Colombia. Los resultados se compararon con los datos arrojados por la metodología convencional de cultivo. Adicionalmente a los aislamientos obtenidos se les evaluó relación clonal mediante la técnica de electroforesis de campo pulsado (PFGE). Resultados Se determinó un total de 123 casos de enfermedad transmitida por alimentos de los cuales 45 muestras biológicas fueron confirmadas por laboratorio y 88 mediante nexo epidemiológico. La metodología molecular detectó 35/45 muestras positivas frente a 17/45 muestras positivas detectadas mediante la metodología convencional. La PFGE demostró relación clonal en cada brote. Conclusión Los resultados del estudio demuestran la aplicabilidad de la técnica molecular como herramienta útil de apoyo diagnóstico en la caracterización de brotes de enfermedad transmitida por alimentos, permitiendo una respuesta oportuna y confiable.(AU)

ABSTRACT Objective To apply a multiplex real-time polymerase chain reaction (PCR) technique to detect Salmonella spp., Listeria monocytogenes, and Yersinia enterocolitica as a diagnostic support tool for the surveillance of foodborne disease outbreaks. Materials and Methods Molecular methodology was applied on clinical samples taken from individuals who were associated with foodborne disease outbreaks in two departments of Colombia. The results were compared with the data obtained by conventional culture methodology. In addition, the clonal relation of the isolations was evaluated using the Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) technique. Results 123 cases of foodborne disease were determined, of which 45 biological samples were confirmed by laboratory and 88 by epidemiological link. The molecular methodology detected 35/45 positive samples versus 17/45 positive samples detected by conventional methodology. PFGE demonstrated a clonal relation during each outbreak. Conclusion The results of the study demonstrate the applicability of the molecular technique as a useful diagnostic support tool to characterize foodborne disease outbreaks, allowing a timely and reliable response.(AU)

Fontes de contaminação de Yersinia enterocolitica durante a produção de leite / Contamination sources of Yersinia enterocolitica during milk production

Objetivou-se determinar as possíveis fontes de contaminação de Yersinia enterocolitica em diferentes pontos do processo de ordenha de vacas leiteiras em oito propriedades da região de Pelotas, RS, ao longo de um ano. Foram analisadas amostras de leite cru de conjunto logo após a ordenha, água de estábulo leiteiro, mão de ordenhador, balde de recolhimento do leite e insuflador de teteiras. As amostras de leite cru e água foram coletadas em frascos estéreis, e as amostras de mão, balde e teteiras com zaragatoas estéreis. As amostras de leite cru foram submetidas a um pré-enriquecimento em água peptonada, sendo posteriormente incubadas em caldo PSTA, adicionado de ampicilina. As amostras de água foram filtradas em membrana de éster de celulose e incubadas em caldo TSB. As amostras de leite após incubação em PSTA, as membranas utilizadas na filtragem da água incubadas em TSB, bem como o material de mãos, balde e teteiras coletadas nas zaragatoas, foram semeados em ágar MacConkey e incubados para a obtenção de colônias. Colônias características foram analisadas por meio de duplex PCR para confirmação da espécie. Os perfis moleculares dos isolados de Y. enterocolitica foram comparados utilizando-se a técnica de rep-PCR. Y. enterocolitica foi isolada de 9,37% das amostras de leite, 6,25% das amostras de água e 12,5% das amostras de mão. Não houve similaridade no perfil de bandas dos isolados encontrados, entretanto foi identificada a presença de cepas diferentes na mesma amostra, demonstrando uma variedade grande de cepas distribuídas no ambiente. A presença de Y. enterocolitica em leite cru no Brasil é preocupante, já que uma quantidade considerável do produto ainda é comercializada de forma clandestina, expondo o consumidor ao risco de infecção pela bactéria, ao consumi-lo sem tratamento térmico adequado.(AU)

This work was performed in order to determine the possible Yersinia enterocolitica contamination sources at different points of the dairy cows milking process in eight properties of Pelotas, RS, in a year. Raw milk samples were analyzed immediately after milking, as well as water from milking parlor, milkers' hands, milk collection bucket, and inflator liners. The samples of raw milk and water were collected in sterile bottles and hand samples, and sterile swabs were used for the buckets and liners. The raw milk samples were subjected to a pre-enrichment peptone water buffered and subsequently incubated in PSTA broth with added ampicillin. Water samples were filtered through cellulose ester membrane and incubated in TSB medium. The milk samples after incubation in PSTA, the membranes used in water filtration were incubated in TSB and the material of the hands material, bucket and liners collected in the swabs were plated on MacConkey agar to obtain colonies. Characteristics of colonies were analyzed by duplex PCR to confirm the species. The molecular profiles of Y. enterocolitica isolates were compared using rep-PCR. Y. enterocolitica was isolated from 9,37% of milk samples, 6,25% of water samples and 12,5% of hand samples. There weren't similarities in the band profile of the isolates found; however, the presence of different strains was found in the same sample, demonstrating a variety of strains distributed in the environment. The presence of Y. enterocolitica in raw milk in Brazil is dangerous, considering that the product is sold clandestinely, exposing consumers to the risk of infection by the bacterium, when consuming it without proper heat treatment.(AU)

Infecção sistêmica por Yersinia enterocolitica em chinchilas (Chinchilla laniger) / Systemic infection by Yersinia enterocolitica in chinchillas (Chinchilla laniger)

Yersinia enterocolitica é uma bactéria Gram-negativa que causa infecções em diversas espécies de mamíferos. O agente, geralmente, provoca infecções restritas ao intestino e linfonodos mesentéricos, porém a infecção pode se tornar sistêmica ocasionando lesões em outros órgãos como fígado e baço. Neste trabalho descrevem-se dois surtos de infecções sistêmicas causadas pela Yersinia enterocolitica em criatórios comerciais de chinchilas no Rio Grande do Sul (Brasil). Os proprietários relatavam que os animais acometidos apresentavam apatia, anorexia e morte. Foram encaminhados 13 animais para a realização de necropsia. No exame post mortem dos animais observou-se esplenomegalia, hepatomegalia e áreas multifocais esbranquiçadas no fígado, baço, pulmões, rins e intestino. No exame microscópico visualizou-se infiltrado inflamatório de neutrófilos e macrófagos, necrose, deposição de fibrina e ocasionalmente pode ser observado coco-bacilos no centro das áreas de necrose. No cultivo bacteriológico obteve-se o crescimento de Yersinia enterocolitica nos animais provenientes dos dois criatórios. O agente foi isolado de amostras no fígado, baço, intestino e pulmões dos animais necropsiados, além do cultivo de fezes de animais de uma das propriedades acometidas. A yersiniose, portanto, é uma patologia que deve ser investigada em casos de mortalidade de chinchilas.

Yersinia enterocolitica is a Gram-negative bacterium, which causes infections in several mammalian species. It is often recognized as an agent causing intestinal and mesenteric lymph nodes lesions. However, Yersinia enterocolitica infection may also become systemic, with lesions in others organs such as liver and spleen. This paper describes outbreaks of systemic infection due to Yersinia enterocolitica in two commercial chinchilla breeders in Rio Grande do Sul (Brazil). Owners reported that affected animals showed apathy, anorexia prior to death. Macroscopic examination performed in 13 animals revealed splenomegaly, hepatomegaly and multifocal whitish pinpoint foci in liver, spleen, lung, kidney and intestine. Microscopically, the affected tissues had infiltration of neutrophils and macrophages, as well as fibrin and necrosis with central areas containing cocobacilli bacteria. Yersinia enterocolitica was isolated from liver, spleen, lung and intestine samples from animals of both breeders, and from feces of chinchillas of one of the breeders. Therefore, yersiniosis is a disease to be investigated in cases of mortality of chinchillas.

Infecciones por Yersinia / Yersinia infections

La Yersinia enterocolitica o la Yersinia pseudotuberculosis pueden tener diferentes formas de presentación entre las que están la enteritis o enterocolitis, la adenitis mesentérica asociada a ileitis distal, la septicemia, infecciones localizadas o manifestaciones extraintestinales. Es responsable de hasta 7 por ciento de los cuadros de gastroenteritis infecciosas y se asocia a una elevada mortalidad post-infección a corto y largo plazo, de 2 a 3 veces mayor. Esta infección bacteriana se adquiere mediante la ingesta oral de productos contaminados y/o inadecuadamente preparados. El aislamiento de Yersinia en las deposiciones es el examen más específico y siempre debe ser solicitado. Debido a su baja sensibilidad los estudios serológicos pueden ser útiles para el diagnóstico, y la reacción de polimerasa en cadena (PCR) puede constituirse próximamente en el examen de elección para el diagnóstico de esta infección. Los antibióticos útiles para su tratamiento son los aminoglicósidos, cefalosporinas de tercera generación, cloranfenicol, quinolonas, tetraciclinas y trimetoprim-sulfametoxazol.

Yersinia enterocolitica or yersinia pseudotuberculosis may have different presentation forms: among those are enteritis or enterocholitis, mesenteric adenitis associated with distal ileitis, septicemia, localized infections or extra-intestinal manifestations. It is responsible for up to 7 percent of infectious gastroenteritis and is associated with high post-infection mortality in the short and long term, which is 2 to 3 times higher. This bacterial infection is acquired through oral consumption of contaminated and/or inappropriately prepared products. Isolation of Yersinia in stool samples is the more specific exam and it should always be performed. Due to its low sensibility, serological studies may be useful for the diagnosis, and the polymerase chain reaction (PCR) may become the elective exam for the diagnosis of this infection in the future. Antibiotics that are useful for its treatment are aminoglycoside, third-generation cephalosporins, chloramphenicol, quinolones, tetracyclines, and Trimetoprim-sulfametoxasol.

Avaliação do desenvolvimento microbiano em superfície de manipulação de alimentos / Evaluation of microbial development in the area of food handling

O objetivo deste trabalho foi avaliar a contaminação microbiológica de tábuas de corte utilizadas no preparo de alimentos, em restaurantes e churrascarias comerciais do município de Santo André – SP. Para a análise microbiológica, foram colhidas amostras na superfície lisa (frente e verso) das tábuas de corte de alimentos, feitas com materiais de madeira e de polietileno. Foi elaborado um questionário para analisar se os proprietários dos estabelecimentos conheciam o programa de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC). Os resultados (tábua de carne) mostraram contaminações pelos seguintes microrganismos: Enterobacter, Proteus sp., Klebsiella, Yersinia, Citrobacter e Escherichia coli. Com esse resultado, conclui-se que nos estabelecimentos de alimentação coletiva, devem ser ministrados programas de educação em saúde, tanto aos proprietários quanto aos funcionários. Não se deve esquecer a importância da boa qualidade da matéria-prima, da higiene das instalações e utensílios e, principalmente, dos métodos de preparo e conservação dos alimentos. Se os estabelecimentos de refeições coletivas pesquisadas estivessem inseridos dentro desse contexto, não ocorreriam as contaminações pelos microorganismos encontrados na pesquisa.

Biodiagnóstico de las diarreas agudas bacterianas y virales / Biodiagnóstico of acute bacterial and viral diarrhea

El diagnóstico de las diarreas agudas bacterianas se realiza mediante la prescripción de coprocultivos típicos u orientados, realizados después del interrogatorio. Después del examen macroscópico y microscópico de las heces (diagnóstico de orientación), el cultivo puede poner en evidencia Salmonella, Shigella, Campylobacter o Yersinia, que serán siempre considerados como patógenos, mientras que, salvo excepción notable, la presencia de E. coli forma parte de la flora cólica comensal. En el niño, los agentes responsables de las gastroenteritis virales son, por orden devreciente de frecuencia, los rotavirus (sobre todo los del grupo A), calicivirus, astrovirus y adenovirus. En el diagnóstico virológico de rutina sólo se detectan rotavirus y adenovirus 40-41. Algunos coprocultivos se realizan en el curso de un cotexto epdemiológico-clínico particular en búsqueda de bacterias enteropatógenas como Vibrio cholerae, Clostridium difficile o E. Coli enterohemorrágico. Este patotipo de E. Coli puede ser responsable del síndrome hemolítico y urémico ligado a la producción de toxinas. Su responsabilidad a menudo se establece por cultivo después de serotipado, por detección de las toxinas producidas o más raramente por métodos serológicos. La diarrea aguda es un fenómeno patológico definido según la OMS por la emisión de al menos tres heces líquidas o blandas al fía con menos de 14 días de antelación. Puede tener diferentes orígene, infecciosos o no. Cuando el origen de la diarrea aguda es infeccioso puede ser bacteriana, viral o parasitaria. Es frecuente en el niño,en el que representa una causa mayor de morbilidad y mortalidad en el mundo. En Frencia, cerca de tres millones de pacientes consultan por una diarrea aguda y sólo del 3 al 4% de estas consultas originan la prescripción de un coprocultivo (1). Es importante para el microbiólogo conseguir informació de los signos clínicos (dolores abdominales, fiebre, aspecto de las heces) y del contexto epidemiológico...

Aplicação da técnica de PCR na detecção de Yersinia enterocolitica em suínos abatidos sem inspeção / PCR technique application in Yersinia enterocolitica detection in non-inspected swine

Avaliou-se a contaminação de carcaças e tonsilas de suínos por Y. enterocolitica em estabelecimentos de abate não inspecionados, comparando a pesquisa microbiológica convencional com a técnica da reação em cadeia de polimerase (PCR) e o tipo de amostra analisada (de tonsila ou de carcaça), como subsídio ao monitoramento microbiano em sistemas de análise de perigos e pontos críticos de controle. Calcularam-se os custos dos dois testes. Não se detectou Y. enterocolitica pela técnica microbiológica convencional, mas, pela técnica de PCR foi possível detectar a bactéria em 40 por cento das carcaças e em 43 por cento das tonsilas, incluindo cepas patogênicas nas tonsilas. Não houve diferença entre os resultados positivos para as amostras de tonsilas e esfregaços de superfície das carcaças. A PCR apresentou-se como uma alternativa na detecção do agente e uma técnica aparentemente mais eficaz, econômica e rápida. Os resultados indicam a PCR como um importante recurso para o controle de qualidade da carne suína.

The contamination of swine carcasses and tonsils by Yersinia enterocolitica in slaughterhouses without inspection was evaluated. The conventional microbiological analysis was compared with the PCR technique of carcass or tonsil swabs, as a subsidy to the microbiological evaluation in the HACCP system. The costs of the two techniques were also calculated. Y. enterocolitica was not detected by the conventional microbiological analysis. Using the PCR, it was possible to detect this bacterium in carcass (40 percent) and tonsil (43 percent) samples. There was no difference between the positive results for the carcass and tonsil samples. The PCR showed to be a more effective, fast and economic alternative for the Y. enterocolitica detection, as compared to the conventional microbiological analysis.

Importância de Yersinia enterocolitica em microbilogia médica / Importance of Yersinia enterocolitica in medical microbiology

Y.enterocolitica é um enteropatógeno invasivo de humanos que provoca uma série de sintomas clínicos intestinais e extra-intestinais que variam desde uma gastrenterite branda a uma linfadenite mesentérica que mimetiza apendicite e em casos raros pode evoluir para uma septicemia.A infecção causada por Y.enterocolitica pode levar a seqüelas imunológicas, incluindo artrite, eritema nodoso e glomerulonefrite.Amostras patogênicas de Y.enterocolitica são associadas a determinados sorogrupos e biotipos e a uma variedade de características fenotípicas relacionadas a virulência.Estudos de genética molecular demonstraram a importância do plasmídio pYV que codifica vários genes de virulência, bem como a importância de vários genes de virulência cromossomais na patogênese dessa bactéria.As infecções intestinais causadas por Y.enterocolitica são normalmente auto-limitadas não havendo usualmente a necessidade de antibioticoterapia.A ocorrência de infecções por Y.enterocolitica no Brasil não é tão freqüente como em países europeus, Japão e Estados Unidos.Essa revisão enfoca as características gerais, a patogênese, os sintomas clínicos, mecanismos de virulência, tratamento e susceptibilidade a antibióticos de amostras de Y.enterocolitica isoladas no Brasil e ao redor do mundo.

Análisis de una cepa de Yersinia enterocolitica aislada de heces diarreicas humanas en Argentina / Analysis of a Yersinia enterocoliticaisolated from human diarreic feces in Argentina

Algunos serotipos de Yersinia enterocolitica ocasionan desde diarreas hasta infecciones invasivas. El objetivo del trabajo fue analizar factores de virulencia y marcadores asociados en una cepa de Y. enterocolitica aislada de heces diarreicas humanas. El aislamiento deY. enterocolitica analizado fue incluído dentro del sub-grupo 1A.La determinación de resistencia al suero humano normal e hidrofobicidad de superficie, así como la búsqueda de los genes vir F y ail, resultaron negativos. Se demostró sin embargo producción de enterotoxina a 20 °C y también a 37 °C en condiciones de osmolaridad y pH similares a las del intestino humano. La enterotoxina, presentó reactividadpor la prueba del ratón lactante, aunque no se pudo comprobarpor PCR la presencia del gen yst. Los resultados obtenidos por nosotros, coincidentes con los de otros investigadores, indican que ciertos aislamientos clínicos de Y. enterocolitica del biotipo 1A (“avirulentas”), son capaces de causar enfermedad, probablemente a través de otros mecanismos, distintos a los caracterizados en especies de Yersinia enteropatógenas.

Some serotypes of Yersinia enterocoliticamight causediarrheas and/or invasive infections. The aim of this work was to analyze virulence factors and associated markers in a strain of Y. enterocolitica isolated from human diarrheic feces. The strain analyzed was included in the biotype 1A. The virulence markers determinationas well as the search of the genes vir F and ail,were negatives. However, it was demonstratedenterotoxin production at 20 °C, andat 37 °C in osmolarity conditions and pH similar to the human intestine. The enterotoxin presented reactivity for the infant mouse test, although it could not be proven the presence of yst gene by PCR. The results obtained by us, coincident with those of other investigators,indicated that certain clinical isolates of Y. enterocolitica of the biotype 1A (“avirulent”), could be the etiological agent of the illness trhough other mechanisms of virulence, that would differ from those previously characterized in species of enteropathogenic Yersinia.

Pesquisa de bactérias patogênicas em leite pasteurizado tipo C comercializado na cidade do Recife, Pernambuco, Brasil / Isolation of pathogenic bacteria in pasteurized type C milk sold in Recife City, Pernambuco, Brazil

In order to improve information about the microbiological quality of the milk commercially available in the city of Recife, 250 samples of pasteurized type-C milk and 50 samples of raw milk were analyzed for Yersinia enterocolitica and Listeria monocytogenes and verify the possible occurrence of Yersinia enterocolitica and Listeria monocytogenes. These bacteria can develop in refrigeration temperatures and are responsible for food-born diseases. Neither Y. enterocolitica nor L. monocytogenes were found in the samples analyzed. However, the presence of Y. intermedia and Y. frederiksenii was detected, these environmental species behave as opportunist pathogens. Through the methodology used for Listeria isolation, one isolate of Salmonella Montevideo was obtained from a sample of pasteurized milk and another isolated from one sample of raw milk. Besides these, several other bacteria species were found. It is likely that the large microbiota present in the samples and the procedures employed to destroy it could have hindered the isolation of Y. enterocolitica and L. monocytogenes.

Visando complementar as informações sobre a qualidade microbiológica do leite comercializado na cidade do Recife, foram analisadas 250 amostras de leite pasteurizado tipo C e 50 amostras de leite cru para a pesquisa de Yersinia enterocolitica e Listeria monocytogenes, bactérias patogênicas capazes de se desenvolverem em temperatura de refrigeração. Y. enterocolitica não foi encontrada em nenhuma das amostras analisadas, entretanto foi detectada a presença de Y. intermedia e Y. frederiksenii, espécies ambientais que se comportam como patógenos oportunistas. L. monocytogenes também não foi encontrada, mas, através da metodologia empregada para seu isolamento foi obtido um isolamento de Salmonella Montevideo em uma amostra de leite pasteurizado e outro em leite cru. Além dessas, várias outras bactérias foram encontradas, supondo-se que a ampla microbiota crescida nos meios empregados pode ter interferido no isolamento da Y. enterocolitica e L. monocytogenes.

Isolation and survival of "Yersinia enterocolitica" in ice cream at different pH values, stored at -18ºC

The presence of "Yersinia enterocolitica" was investigated in 203 samples of industrial (123) and non-industrial ice cream (80). Two "Y. enterocolitica" strains were isolated from non-industrial ice cream, which suggests the possibility of post-manufacturing contamination. One strain was typed as B:1A, O:3,50,51; lis Xz, while the other one was biotyped as B:1A but not serologically typed. Survival of "Y. enterocolitica" was investigated by inoculating nine samples of industrially manufactured ice cream to contain 20 CFU/ml of "Y. enterocolitica" and stored at -18ºC for 480 days. The inoculated samples were classified into three different groups according to their pH (Group 1: pH 4-5; Group 2: pH 5-6 and Group 3: pH 6-7). Viability was determined by a contamination of direct plating and enrichment. In Group 1, "Y. enterocolitica" was not detected after 150 days of storage, while in Groups 2 and 3, this microorganism was isolated until day 480 of storage. These fidings suggest that the survival time of "Y. enterocolitica" in ice cream stored at -18ºC is significantly (p<=0.05) lower at pH values under 5.

Serological and biochemical characteristics of virulence plasmid of Yersinia enterocolitica isolates from chicken in the Islamic Republic of Iran

Pathogenic Yersinia enterocolitica harbour plasmid that is essential for virulence. We studied the characteristics of virulence plasmid using serological, biochemical and bioassay tests in Y. enterocolitica isolates of chicken using plasmid curing. Plasmid-cured isogenic derivatives [2029c and 2150c] were obtained from two isolates of Y. enterocolitica [RTCC 2029 and RTCC 2150]. The results demonstrated that plasmid-bearing isolates [2029 and 2150] were human-serum-resistant when grown at 37 °C, but were sensitive when grown at 25 °C, whereas plasmid-cured isolates [2029c and 2150c] were sensitive when grown at both temperatures. Also autoagglutination, calcium-dependency tests and experimental infection in mice demonstrated that these phenotypes were associated with the virulence plasmid

Pesquisa de Yersinia enterocolitica em lingüiças frescas de porco em Porto Alegre, RS / Investigation of Yersinia enterocolitica in fresh pork sausages in Porto Alegre, RS, Brazil

Foram analisadas 96 amostras de lingüiça fresca preparadas unicamente com carne suína adquiridas no comércio de Porto Alegre, com o objetivo de determinar a presença de Yersinia enterocolitica. A metodologia empregada baseou-se na incubaçäo em salina fosfatada tamponada a 4§C como enriquecimento e isolamento em ágar seletivo para yersinias (ágar cefsulodina-irgasan-novobiocina). Em nenhuma das amostras de lingüiça analisadas no presente estudo, foi encontrada a Y. enterocolitica. A mesma metodologia foi testada em ensaios de recuperaçäo de Y. enterocolitica de amostras de lingüiça contaminadas artificialmente com diferentes inóculos da bactéria. O método apresentou boa sensibilidade, mas baixa reprodutibilidade nos ensaios de recuperaçäo, onde apenas inóculos de 6,3x10(4)UFC/ml puderam ser sempre recuperados. A partir destes resultados, conclui-se que novas etapas de enriquecimento e seleçäo devem ser adicionadas à metodologia testada para garantir uma maior reprodutibilidade, principalmente em níveis de contaminaçäo mais baixos.

Frecuencia y biodiversidad de algunas bacterias enteropatógenas aisladas en niños con síndrome diarreico agudo / Frequency and biodiversity of some enteropathogenic bacteria recovered from children with acute diarrheic syndrome

El estudio etiológico de la diarrea aguda en el niño se ve limitado por las técnicas actualmente disponibles con fines clínicos. La aplicación de técnicas de biología molecular en el análisis de deposiciones permite incrementar la detección de enteropatógenos y una caracterización fenotípica más acabada de las cepas aisladas permite describir mejor su diversidad y caracterizar epidemiológicamente los episodios observados en cada temporada estival. En un estudio piloto efectuado en la ciudad de Concepción, se aplicaron en el estudio etiológico de la diarrea en niños entre 0 y 4 años de edad consultantes en un servicio de urgencia, las técnicas convencionales de cultivo e identificación por pruebas bioquímicas según Edwards y Ewing, la búsqueda de genes de virulencia de Escherichia coli enterohemorrágica más el análisis de serotipo, biotipo, antibiotipo y perfil plasmidial de las cepas enteropatógenas aisladas. En 32 (25,3 por ciento) de 127 niños con diarrea de edad entre 5 meses y 4 años de detectó la frecuencia de los siguientes enteropatógenos: Shigella sonnei 13,4 por ciento Shigella flexneri 6,3 por ciento, Yersinia enterocolitica 2,4 por ciento, Shigella boydii 0,8 por ciento, Salmonella typhimurium 1,6 por ciento y Salmonella hadar 0,8 por ciento. La frecuencia de aislamiento aumentó en relación al aumento de la edad desde 0 por ciento en el grupo etario de 4 a 5 meses, 6,3 por ciento en el de 6 a 11 meses, 33,1 por ciento en el de 12 a 23 meses, hasta 68,7 por ciento en el grupo de 24 a 47 meses. Shigella spp. fueron las de mayor frecuencia relativa de aislamiento con 81,1 por ciento. El rendimiento de las determinaciones feno y genotípicas para estudio de biodiversidad fue variable en las especies. Las 8 cepas de S. flexneri se diferenciaron en 6 grupos en base a 3 serotipos, 5 antibiotipos y 5 perfiles plasmidiales. Las 17 cepas de S. sonnei se discriminaron en 11 grupos determinados preferentemente por los patrones plasmidiales. La amplificación aleatoria mediante RAPD en S. flexneri y S. sonnei no aportó mayor grado de biodiversidad que la establecida por las otras determinaciones. El antibiotipo y perfil plasmidial fueron útiles en discriminar en 2 grupos las 3 cepas de Y. enterocolitica, marcadores que además permitieron sugerir que las S. typhimurium aisladas serían una misma cepa

Plásmido de virulencia en yersinia enterocolítica 0-3 de origen murino / Virulence plasmid in yersinia enterocolitica 0-3 of murine origin

Background: Pathogenic strains of Yersinia enterocolitica harbor a virulence plasmid of 45-48 megadalton that can be detected using different techniques. Rodents are important reservoirs of Y enterocolitica. Aim: To investigate the carrier status of Y enterocolitica in murine rodents. Material and methods: Two hundred sixty one mice and rats were captured in rural and urban areas of Valdivia. Y enterocolitica was cultured from viscera and fecal homogenates. Virulence plasmids were detected using crystal violet binding. Results: Thirteen Y enterocolitica strains were isolated from 11 rodents. Ten strains belonged to the biotype 1 and three to the biotype 4, serotype O:3. The most frequently infected rodent species were R norvergicus (20 per cent), followed by A longipilis (11 per cent), A olivaceus (2 per cent) and O longicaudatus (2 per cent). Conclusions: Rodents, and specially the domestic rat, can be an important source of Y enterocolitica infection for human and susceptible animal species

Ausência de Yersinia enterocolitica em alimentos, e reservatórios animais, em áreas do Estado de Pernambuco, Brasil / The absence of Yersinia enterocolitica in foods and animal reservoirs in areas of the state of Pernambuco, Brazil

Através das análises efetuadas, em 96 amostras de hortaliças cruas, coletadas em 5 restaurantes da cidade do Recife, que servem almoço no peso, não foram encontradas Yersinia enterocolitica nem outras enterobactérias patogênicas. As análises realizadas a partir dos "swabs" orais e retais, obtidos em 15 suínos aparentemente sadios do município de Bonito, no Estado de Pernambuco, também não evidenciaram a presença de Y. enterocolitica. Foram obtidas amostras para análises em 22 roedores e um espécimen de marsupial, entre os quais também não foram encontrados nem Y. enterocolitica nem outros enteropatógenos.

A search for the presence of enteropathogenic bacteria in fresh vegetables obtained in 5 restaurants from the city of Recife, revealed neither Yersinia enterocolitica nor other pathogenic bacteria in 96 samples analyzed. Furthermore, Y. enterocolitica was not found in the oral and rectal swabs taken from 15 apparently healthy pigs at an abattoir in the municipality of Bonito in the Pernambuco State. Another search in which twenty one rodents from four species and one marsupial specimen were examined did not detect the presence of Yersinia and other enteropathogenic bacteria.

Microbiological evaluation of pizza with special concern to food-borne pathogens

Thirty samples of pizza randomly collected from different restaurants and pastries in Cairo and Giza governorates were investigated to evaluate their microbiological quality. The results indicated that the mean Aerobic plate, Enterobacteriaceae, Aerobic sporeformers, Bacillus cereus, Staphylococci, Staph. aureus, Enterococci, Pseudomonas, Aeromonas, Coliforms, Enteropathogenic Escherichia coli [SPEC] and yeast and mold counts per gram were 1.5 x 10 5, 2 x 10 4, 6.1 x 10 2, 2.1 x 10 2, 2.9 x 10 3, 6.1 x 10 2, 3.2 x 10 4, 2.4 x 10 2, 9.8 x 10 2, 1 x 10 2 and 6.5 x 10 3, respectively. Pizza was found to be contaminated with newly emerging food-borne pathogens such as Aeromonas hydrophila, as well as Salmonella species. Escherichia coli, Enterobacter agglomerans, E. coloacae, Citrobacter diversus, C. freundii, Klebsiella ozenae and K. rhinoschleromata were isolated in percentage ranged from 3.3 to 20%. However, neither Listeria monocytogenes nor Yersinia enterocolitica could be isolated from the examined samples. The public health hazards of the isolated organisms, as well as suggested control measures were fully discussed in order to improve the quality of pizza